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病原体简介

呼肠孤病毒3型

呼肠孤病毒3型的发现与分类

 

呼肠孤病毒3型最初于上世纪50年代从人体内分离得到，之后又在多种哺乳动物中发现。呼肠孤病毒命名是取自英文单词的词头组合而成，全称是呼吸道（repiratory）,肠道（enteric）,孤儿（orphan）。呼肠孤病毒3型（reovious type3,Reo-3）是正呼肠孤病毒属的代表株，正呼肠孤病毒属主要包括哺乳动物呼肠孤病毒和禽呼肠孤病毒；哺乳动物呼肠孤病毒分为3个血清型：Reo1,2,3。3个型具有共同的补体结合抗原，用中和试验和血凝抑制试验可以鉴定。Reo-3是国标要求SPF级试验大鼠，小鼠，豚鼠，仓鼠必检的项目之一，定期抽样检测是预防和控制鼠群中Reo-3感染的重要手段。哺乳动物正呼肠孤病毒3型在实验室小鼠中的血清学患病率非常低,以我公司2021-2023年七月检测数据为例,Reo-3阳性比例为0.14%,Reo-3可疑比例为0.03%，检测基数为20796份。

病原学特征

 

呼肠孤病毒3型（reovirus type 3）核酸型为双股RNA，病毒粒子呈球形，无包膜，有一个核心，双层衣壳。完整的病毒粒子直径76nm左右，核心的直径52nm左右，电子显微镜下很容易看到病毒粒子表面的壳粒，外衣壳共92个壳粒，分别由五邻体和六邻体组成， 其中80个为六邻体，12个为五邻体，壳粒为长10nm、宽8nm左右的空棱状结构。内衣壳呈二十面体5度对称排列。体外通过蛋白酶降解完整的病毒粒子，可以生成两种次病毒粒子（subviral particle, SVP），即中间次病毒粒子（intermediate subviral particle, ISVP）和核心（core）。

流行病学

 

Reo-3主要是通过呼吸道，空气和粪口等传播途径，无明显季节性。有相关研究提出在环境中能稳定生存是造成病毒污染主要原因的观点。Reo-3 的可感染范围非常广泛，如人类、小鼠、猴、牛、犬、鸡等，另外还从大 鼠、猪、马、羊、兔、有袋动物的爬行动物中检出Reo-3抗体。小鼠品系之间感染略有差异，NIH小鼠，BALB/C，昆明小鼠易感性高。

临床症状及病理变化

 

Reo-3主要临床表现以油性被毛效应和脂肪性下痢，急性病例主要见于新生乳鼠和断乳小鼠，慢性病例则见于28日龄以上的小鼠。限定在28天内的急性期表现为：眼观病变，肝脏增大，颜色变暗且带有灶性环状黄色区，直径最大3毫米，大小不等，小肠可能变红或扩张。在个别病例中，心脏心外膜出现小的环状病灶，偶尔在肺中发现出血区。脑可能出现肿胀和充血。在未成年小鼠中，小肠内容物经常是柠檬黄色；慢性期表现为：小鼠消瘦，有时出现黄疸，可能出现脱发区，轻度肿大的肝呈暗色可见被膜下的淡黄色病灶。腹膜充血，有时可见渗出液。在发病过程中的后期脾脏可能中等程度肿大。相关实验表明：Reo-3经口腔感染新生乳鼠，4天肝脏可见单核细胞聚集，7天肝细脏胞肿大3-4倍，枯否氏细胞增生，14天坏死细胞溶解，坏死灶周围细胞肌化；胰腺在感染后3天胞浆空泡化，10-14天整个胰腺发生坏死；心脏感染后一周可见左心室乳头肌变性、坏死，并伴有水肿和巨噬细胞浸润；肺可见扩散性出血、水肿；中枢神经系统在感染后9天神经元变性，10天血管管套现象明显， 脑膜有嗜中性自细胞浸润。14天脑炎病变加重并广泛蔓延，在坏死区域内有小出血点，胃肠道固有膜淋巴管扩张。

理化特性

 

Reo-3经56℃2h或60℃30min仍可存活，在4℃其传染性至少可维持2个月。 对过氧化氢、10%苯酚、0.3%甲醛或20%来苏儿有抵抗力，乙醚处理不受影响， 氯仿不影响其感染力，但可破坏其血凝素。在PH2.2-8.0的环境中稳定。但70%乙醇在较长时间作用后使其灭活，过碘酸盐也可迅速杀死呼肠孤病毒。有研究发现Mg 2+在50℃可提高Reo-3的滴度，在2mol/LMgCl2中5-15min可使感染滴度增加4-8 倍，原因可能是Mg 2+可使无活性的病毒粒子产生活性。紫外线也有破坏病毒的作用，但是已经在紫外线灭活的病毒标本内多次发现多数感染复活现象。

Reo-3可在原代恒河猴、猫、猪、犬肾细胞上增殖，也可在L细胞、BHK-21细胞、FL细胞、BS-C-1细胞和KB细胞等传代细胞上增殖，7-14天可见特征性细胞病变和嗜酸性胞浆内包涵体。用胰酶或其他蛋白水解酶处理病毒标本，如无花果蛋白酶、番木瓜酶、胃蛋白酶、链霉蛋白酶处理可提高病毒病毒滴度，其原因可能是酶类可加速病毒从一个细胞向另一个细胞转移。

对研究的干扰

 

Reo-3感染小鼠可产生肝炎、脑炎、胰腺炎等症状，使实验研究中断，造成人力、物力的极大浪费。小鼠感染 Reo-3 可使体内胰淀粉酶、脂肪酶活性降低，胰蛋白酶活性升高；也可破坏胰岛的β细胞，造成胰岛素分泌减少，产生类似糖尿病的代谢和病理改变。Reo-3在宿主对环境致癌物的应答中也有重要作用，可起免疫刺激作用。有报道称该病毒在实验小鼠病毒中占第二位，给血液制品，单克隆抗体，细胞培养等外来致病因子的检定及动物试验带来一定的困难。

检测方法

 

目前用于检测呼肠孤3型病毒的主要方法有病理组织学检查，病毒分离鉴定，酶联免疫吸附试验（ELISA）,免疫荧光试验（IFA）等血清学方法，以及分子生物学检测方法等。ELISA方法是呼肠孤病毒3型病毒血清检测的首选方法，可重复实验或结合IFA结果做最终判定，IFA通常被认为是金标准。免疫缺陷小鼠可用分子生物学检测方法对其进行病原检测。

预防与控制

 

普通小鼠群中，使用屏障系统有助于预防和感染的蔓延，剖腹取胎是控制和净化鼠群中Reo-3感染的重要措施。Reo-3可以通过蚊虫传播，因此应该严格采取隔离措施，保持房舍内环境稳定。人群也可感染Reo-3,应当随时注意饲养人员可能将Reo-3传递给小鼠，定期检测饲养人员的Reo-3血清抗体可以有效避免。

图片来源：赛业生物

参考文献

 

1.冷雪梅,胡建华,高诚等.呼肠孤病毒3型S1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽医科学,2008,No.371(07):582-586.DOI:10.16656/j.issn.1673-4696.2008.07.007.

2.宋宇,周洁,高诚等.呼肠孤病毒3型S1基因在Sf9昆虫细胞中的表达[J].上海交通大学学报(农业科学版),2011,29(01):28-32.

3.Kraft N L ,赵继勋 .小鼠呼肠孤病毒3型感染(肝脑脊髓炎ECHO 10病毒感染)[J].实验动物科学,1985(01):18-24.

4.Taofeng L,Lingyun T,Haibo Y, et al. Development of a reverse transcription loop mediated isothermal amplification assay for the detection of Mouse reovirus type 3 in laboratory mice[J]. Scientific Reports,2021,11(1).

5.Fingas F, Volke D, Bielefeldt P, Hassert R, Hoffmann R. Detection of mammalian orthoreovirus type-3 (Reo-3) infections in mice based on serotype-specific hemagglutination protein sigma-1. Virol J. 2018 Jul 27;15(1):114. doi: 10.1186/s12985-018-1021-8. PMID: 30049287; PMCID: PMC6062942.

 

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