西山生物

病原体简介

兔脑原虫

兔脑原虫病（Encephalitozoonosis）是由兔脑原虫引起的一种人兽共患寄生虫病。兔，豚鼠和小鼠是兔脑原虫的主要感染宿主，通常为隐性或慢性感染，会在宿主免疫力低下时，成为致命病因。所以会给实验研究结果的判断造成干扰，养殖业带来一定的经济损失。

病原学

 

兔脑原虫属于原生动物门，微孢子虫纲，微孢子虫目，微粒子虫科，脑原虫属。兔脑原虫的不同种的孢子在形态上有所不同，多为卵圆形或杆形，大小约为1.5μm-2.5μm，内有细胞核和少量空泡，囊壁厚，一端有极体，由极体发出极丝，沿内壁盘绕，极丝自然伸出。用姬姆萨染液染成蓝色，过氧化物染成深红色，革兰染色阳性，PAS反应小颗粒阳性。虫体标本须在相差显微镜下观察。

它们感染能力的决定性特征是极性管的存在，极管是由蛋白质组成的螺旋状丝状空心管，包含在它们的孢子中（Xu and Weiss，2005）。1995年，Didier等人（1995）通过鉴定核糖体RNA基因内部转录间隔（ITS）区域的明显差异，描述了至少三种E. cuniculi菌株（I，II和III）的存在。菌株的类型最终与分离出它的动物物种相关联，因此I型被认为是“兔子品系”，II型被称为“小鼠品系”，III型被指定为“狗品系”，IV型被称为“人类品系”（Mathis等人，2005年;塔拉巴尼等人，2010年）。然而，尽管每种菌株都有优先的宿主物种，但在实践中，目前已知E. cuniculi具有较低的宿主特异性。在人类中，除了IV型菌株外，其他三种菌株（I，II和III）也被诊断出来，证明了其人畜共患的潜力（Sak等人，2011a）。

流行病学

 

兔脑原虫病在世界各地广泛分布，在我国也有发生。感染兔或其他收感染动物都是传染来源。主要经口感染，也可能经吸入感染或同居等途径水平传播，也可通过胎盘垂直传播。感染后短时间内便可在多种组织中检出。感染后前1个月，主要在肾脏，肺脏和肝脏，之后主要出现在肾脏，脑和心脏。感染后3周血清中有抗体存在，持续60天后下降。感染性孢子通过泌尿和生殖系统排出体外。虫体在宿主存活的时间相当长，有的甚至终生。尽管孢子在体外不进行生长发育，但对体外环境有一定的抵抗力。Kváč等人（2016）首次报道了牛奶中存，并表明即使在高温短时（HTST）巴氏杀菌过程（72°C持续15秒或85°C持续5秒）后，其孢子仍然具有传染性。

2015国外一项研究使用血清学（IFAT和ELISA）和分子（PCR）测定法调查了埃及不同省份不同动物宿主中的患病率。从七种不同种类的动物（牛、水牛、绵羊、山羊、兔子、狗和大鼠）共收集了324份血清和274份尿液样本。血清学检查结果证实，38.9%的动物存在的抗体阳性。在尿液样本中，只有5个阳性（1.82%）是通过PCR检测到的。

临床症状及病理变化

 

大部分感染兔脑原虫的动物都不表现临床症状。但对于先天感染的幼年犬多会出现是神经症状包括精神沉郁，共济失调，失明和癫痫等，严重的会发生死亡。偶尔有兔出现神经症状，多数为慢性或隐性感染，在应激状态下就会呈现进行性衰弱，体重减轻和尿毒症。免疫功能低下的人群，如艾滋病患者对兔脑原虫更易感。兔脑原虫及其代谢产物对于肾组织的影响，导致其重吸水和钠的功能明显降低，出现多尿等情况，病情严重时，还会出现大量蛋白尿。

兔脑原虫主要感染脑和肾脏，在脑组织形成肉芽肿，非化脓性脑炎和间质性肾炎，严重的间质性心肌炎。病变肾脏肿大，被膜有出血点，伴不规则灰白色凹陷，深入皮质部。显微镜下在肾脏皮质区有大量以虫体为中心，周围由淋巴细胞，浆细胞及巨噬细胞形成的肉芽肿，间质中有大量的淋巴细胞和浆细胞。髓质中亦可见少量的病变，肾小管多扩张，肾小管上皮细胞坏死脱落。脑内可见以虫体为中心，周围由淋巴细胞、浆细胞、小神经胶质细胞及上皮细胞包围的肉芽肿病变，有些小血管周围有巨噬细胞包围，有些病灶周围以神经胶质细胞增生为主。眼部病变包括葡萄膜炎和白内障。

实验室诊断

 

病理组织学检测，病料接种小鼠，2-3周后，取腹水可有效检出。或接种兔的脉络丛单层细胞经4-21天，可在感染细胞内检出。

免疫学检测，特异抗体在3-4周出现，早于病理变化或虫体在尿液种出现的时间。新生动物可获得母体的抗体，持续4周。血清学检测已被用于检测针对兔脑原虫的抗体，以确认/排除可疑动物中是否存在感染，甚至识别无症状携带者个体。

核酸检测，在多种组织器官的检出，大脑被认为是最合适组织，因为它可能是感染个体中孢子浓度最高的器官（Csokai等人，2009年;雷皮格等人，2013 年）。尿液，粪，脑脊髓液中可检出，根据Cox等人（1979年），感染过程直到第63天，大量的孢子在急性感染兔子的尿液中排泄，但此后排泄变得间歇性和少量，在感染后约98天停止，这可能导致假阴性结果。葡萄膜炎的房水或液化晶状体样本可作为病料，亦可检出。

对研究的影响

 

兔脑原虫的寄生部位时毒理学及相关研究的重要器官。感染动物的无症状表现，但其免疫机能处于低下状态，存在影响试验结果的可能。其肉芽肿状病变会干扰治疗效果的评估。严重的会导致肾衰竭或神经症状。所以，感染动物不宜进行试验研究。

预防和清除

 

兔脑原虫孢子对环境有一定的抵抗力，干燥孢子可在22℃条件下至少存活4周，在湿冷环境下存活数月，高压灭菌，氧化消毒和杀菌剂都能杀死孢子。目前认为最有效的预防措施是加强饲养管理，保障防疫措施，创造良好的卫生条件卫生条件和淘汰已感染的种用动物。建立无病群体，是预防本病的最根本方法。由于脑原虫多为隐性感染，因此，引进时必须进行病原体的检验，防止带入本病，日常检查同样必要。

我国第三方检测机构苏州西山生物2021-2022年的检测数据显示：兔的兔脑原虫抗体阳性率为20.6%。2020版药典，其中三部“特定生物原材料/动物及辅料”中的“生物制品生产及检定实验动物质量检测”篇中，实验小鼠，实验兔，实验长爪沙鼠作为必要时检测项目列出。GB 14922-2022实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测，对于实验兔作为必要时检测项目列出。无论是数据还是药典和国标的要求都表达了一个诉求，实验动物机构和从业人员应对此病原体多加关注。 

参考文献

 

1 . 陈会良.兔脑原虫病的研究进展[J].中国畜禽种业,2012,(3):114-115.

2 . 顾有方,沈永林,汪志楷.兔脑原虫病[J].畜牧与兽医, 1997, 29(1):35-37

3 . 实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测GB 14922-2022

4 . 实验动物 兔脑原虫检测方法. GB/T 18448.3-2001

5 . 田克恭,贺争鸣,刘群等． 实验动物疫病学[M]．中国农业出版社,  2015: 831-834.

6 . Abu-Akkada, S.S., Ashmawy, K.I. & Dweir, A.W. First detection of an ignored parasite, Encephalitozoon cuniculi, in different animal hosts in Egypt. Parasitol Res 114, 843–850 (2015).

7 . Magalhães, T.R., Pinto, F.F. & Queiroga, F.L. A multidisciplinary review about Encephalitozoon cuniculi in a One Health perspective. Parasitol Res 121, 2463–2479 (2022).

 

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